壮药古羊藤中一个新的倍半萜
doi: 10.11931/guihaia.gxzw202503043
韦美琴 1 ， 刘美余 1 ， 全珈玲 1 ， 廖广凤 1 ， 张进燕 1 ， 李慰凤 1 ， 罗轶 2 ， 卢汝梅 1
1. 广西中医药大学 药学院，南宁 530200
2. 广西壮族自治区药品检验研究院/国家药品 监督管理局中药材质量监测与评价重点实验室，南宁 530020
基金项目: 广西壮族自治区高校黄大年式教师团队“中药学传承创新教师团队”项目（桂教教师[2023]31号）；广西药品检验研究院横向项目；广西中医药大学校级科研项目（XP023130）；国家级大学生创新创业训练计划项目（XDC23030）。
A new sesquiterpene from Zhuang medicine Streptocaulon juventas
WEI Meiqin 1 ， LIU Meiyu 1 ， QUAN Jialing 1 ， LIAO Guangfeng 1 ， ZHANG Jinyan 1 ， LI Weifeng 1 ， LUO Yi 2 ， LU Rumei 1
1. College of Pharmacy, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530200, China
2. Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute for Drug Control/NMPA Key Laboratory for Quality Monitoring and Evaluation of Traditional Chinese Medicine, Nanning 530020, China
摘要
为探究壮药古羊藤（Streptocaulon juventas）的化学成分及其细胞毒活性，该研究采用硅胶、Sephadex LH-20、C18中低压和半制备高效液相色谱等方法对古羊藤中化学成分进行分离，通过理化性质和MS、NMR、单晶X射线衍射等方法鉴定化合物结构，并运用MTS法检测单体化合物对5种肿瘤细胞增殖的抑制活性。结果表明：（1）从古羊藤中分离鉴定出16个化合物，分别为古羊藤二酮 A（1*）、6-姜烯酚（2）、莪术烯醇（3）、curcuzedoalide（4）、16-dehydropregnenolone（5）、neridienone A（6）、12β-羟基-孕甾-4,16-二烯-3,20-二酮（7）、杠柳苷元（8）、acovenosigenin A（9）、洋地黄毒苷元（10）、digitoxigenin-3-O-β-D-glucoside（11）、杠柳苷元葡萄糖苷（12）、8-hydroxypinoresinol（13）、布卢门醇 A（14）、布卢门醇 B（15）和东莨菪内酯（16）。其中，化合物1*为新化合物，化合物2-4、6、7、13-15为首次从该植物中分离得到。（2）体外活性实验结果显示，化合物2、6-12对人白血病HL-60、非小细胞肺癌 A549、肝癌SMMC-7721、结肠癌SW480细胞具有较好的增殖抑制活性，其IC50值分别为0.97~23.77 μmol·L-1、0.87~29.43 μmol·L-1、0.07~13.77 μmol·L-1、0.09~16.47 μmol·L-1。（3）化合物2、6-10、12对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制活性，其IC50值为0.07~27.73 μmol·L-1。该研究结果丰富了古羊藤的化学成分，为抗肿瘤活性研究提供了参考。
Abstract
To investigate the chemical constituents and their cytotoxic activities of Streptocaulon juventas, a plant used in Zhuang medicine, chemical isolation was performed using a combination of chromatographic techniques, including silica gel, Sephadex LH-20, medium-low pressure C18 and semi-preparative high-performance liquid chromatography. Structural elucidation of the isolated compounds was achieved through comprehensive analysis of physicochemical properties and spectroscopic data, such as mass spectrometry (MS), nuclear magnetic resonance spectroscopy (NMR) and X-ray single crystal diffraction. The cytotoxic activities of the isolated monomeric compounds against five human tumor cell lines were assessed using the MTS assay to determine their inhibitory effects on cell proliferation. The results were as follows: (1) Sixteen compounds were successfully isolated and identified from S. juventas, which were strejuvdione A (1*), 6-shogoal (2), curcumenol (3), curcuzedoalide (4), 16-dehydropregnenolone (5), neridienone A (6), 12β-hydroxy-pregna-4,16-diene-3,20-dione (7), periplogenin (8), acovenosigenin A (9), digitoxigenin (10), digitoxigenin-3-O-β-D-glucoside (11), periplogenin glucoside (12), 8-hydroxypinoresinol (13), blumenol A (14), blumenol B (15), and scopoletin (16). Notably, Compound 1* was a new compound. Furthermore, compounds 2-4, 6, 7, and 13-15 were isolated from this plant for the first time. (2) Results of in vitro activity experiments revealed that compounds 2, 6-12 exhibited significant proliferation inhibitory activities against leukemia HL-60, lung cancer A549, liver cancer SMMC-7721, and colon cancer SW480 cells, with IC50 values of 0.97-23.77 μmol·L-1, 0.87-29.43 μmol·L-1, 0.07-13.77 μmol·L-1, and 0.09-16.47 μmol·L-1, respectively. (3) Compounds 2, 6-10 and 12 demonstrated inhibitory effects on breast cancer MDA-MB-231 cells, with IC50 values of 0.07-27.73 μmol·L-1. The research results enrich the chemical components of S. juventas and provide a reference for the research on its anti-tumor activity.
壮药古羊藤为萝藦科（Asclepiadaceae）马莲鞍属（Streptocaulon）植物马莲鞍（Streptocaulon juventas）的干燥根茎，又名藤苦参、南苦参，具有清热解毒，散瘀止痛等功效，是广西特色壮药材（罗宇东等，2018）。据《广西壮族自治区壮药质量标准》记载，古羊藤壮名为勾咩（Gaeumbe），性寒，味苦，微甜，有小毒，具有清热毒、除湿毒、通水道谷道之效，临床用于治疗贫痧（感冒）、白冻（泄泻）、阿意咪（痢疾）、心头痛（胃痛）、笨浮（水肿）和能唅能累（湿疹）等（广西壮族自治区食品药品监督管理局，2011）。第四次全国中药资源普查发现，广西南宁、百色、崇左、河池等地区古羊藤资源丰富，壮族民间用于治疗肝癌和乳腺癌等恶性肿瘤。“通水道谷道”壮医传统功效与肿瘤微环境调控相关，现代研究发现，古羊藤中的强心苷类成分能通过抑制NF-κB信号通路诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用（Anaya-Eugenio et al., 2019）。
古羊藤中含有强心苷类、甾体类、三萜类及苯环衍生物等多种类型化学成分（王宏，2017）。目前已分离鉴定出50多种强心苷和30多种三萜，这是其中最主要的两类成分（宁书怡和冯心池，2020）。该植物提取物具有良好的抗肿瘤活性（Ueda et al., 2003）。Han等(2010)发现古羊藤75%乙醇提取物对人肺腺癌A549细胞株表现出显著增殖抑制作用，主要活性成分为强心苷类化合物洋地黄毒苷、红柳苷元和红柳糖苷。近20年来萝藦科植物中的C21甾体及其抗肿瘤活性受到越来越多的关注，Zhu等（2018）报道从古羊藤中发现13个C21甾体化合物，其中新化合物(3β,20R)-pregn-14(15)-ene-3,20,21-triol-3-O-β-D-glucopyranoside对HepG2显示出良好的抑制活性。可见，古羊藤中强心苷和C21甾体化合物等类成分具有重要研究价值，其结构特点、多样性和抗肿瘤活性值得深入研究。
项目组前期采用MTS法对古羊藤乙醇提取物及其不同极性部位对人白血病HL-60、非小细胞肺癌A549、肝癌SMMC-7721、乳腺癌MDA-MB-231和结肠癌SW480肿瘤细胞增殖的抑制作用进行测试，结果表明石油醚部位对5种肿瘤细胞增殖均有抑制作用（IC50值为15.24~53.09 μg·L-1），乙酸乙酯部位对5种肿瘤细胞均有显著的抑制作用（IC50值为0.426~2.801 μg·L-1），表明这2个部位是抗肿瘤的主要活性部位。基于此，本研究综合运用中药化学技术方法对古羊藤乙醇提取物的石油醚部位和乙酸乙酯部位的化学成分进行分离鉴定，并采用MTS法评价单体化合物对肿瘤细胞增殖的抑制活性，为阐释古羊藤抗肿瘤活性和药效物质基础提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 药材
古羊藤药材由广西仙茱中药科技有限公司提供，经广西中医药大学樊兰兰教授鉴定为萝藦科马莲鞍属植物马莲鞍（Streptocaulon juventas）的干燥根茎。
1.2 仪器和试剂
500 MHz Bruker AVANCE Ⅲ核磁共振波谱仪[布鲁克（北京）科技有限公司]；LC-52制备型高效液相色谱仪（赛谱锐思科技有限公司）；G6230飞行时间质谱仪（安捷伦科技有限公司）；REVELERISX2中压液相色谱仪（格雷斯公司）；半制备型液相色谱柱（YMC-Pack，ODS-A，21.2 mm× 250 mm，5 μm）；CCA-1112A爱朗旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）；分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；显微熔点仪X-4B（上海仪电物理光学仪器有限公司）；ZF-2三用紫外色谱仪（上海市安亭电子仪器厂）；C18材料（日本株式会社维美希上海代表处）；凝胶Sephadex LH-20（美国法玛西亚公司）；硅胶（青岛海洋化工有限公司）；色谱级甲醇、乙腈（赛默飞世尔科技公司）；乙酸乙酯，甲醇等分析纯试剂（西陇科学股份有限公司）；紫杉醇、阿霉素（doxorubicin，DOX）、MTS试剂盒（普洛麦格公司）。用于体外细胞毒活性实验的5株肿瘤细胞均购自美国模式菌种收集中心（American Type Culture Collection）。
1.3 研究方法
1.3.1 提取和分离
取古羊藤药材25 kg，用乙醇回流提取2次，每次2 h，合并提取液。乙醇提取液经减压浓缩得浸膏4.7 kg，将浸膏混悬于水中，依次用极性由小到大的溶剂萃取，各萃取液分别减压浓缩，得到3个部位，分别为石油醚部位310 g，乙酸乙酯部位162 g和正丁醇部位648 g。
石油醚部位通过硅胶柱色谱进行初步分离，以石油醚-乙酸乙酯(100∶ 0→0∶100，V/V)为流动相梯度洗脱，依据TLC分析结果，将洗脱液合并，共获得 9 个组分，依次标记为 Fr.s1~Fr.s9。其中，Fr.s4采用中压液相色谱，以甲醇-水(30%~100%)为流动相进行梯度洗脱，合并流分后得到Fr.s4-1~Fr.s4-9。Fr.s4-4先后经硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20色谱分离纯化，最后经半制备液相色谱(乙腈∶水，48∶52, V/V)分离得到化合物2(tR=80 min, 10.9 mg)；Fr.s4-3通过半制备液相色谱分离(甲醇∶水，69∶31, V/V)得到化合物3(tR=39 min, 5.6 mg)；Fr.s4-2通过半制备液相色谱分离(乙腈∶水，30∶70, V/V)得到化合物4(tR=83 min, 7.5 mg)。Fr.s5经中低压液相色谱分离，以甲醇-水(30%~100%)为流动相进行梯度洗脱，合并流分得到Fr.s5-1~Fr.s5-8。Fr.s5-5先采用硅胶柱色谱分离，经半制备液相色谱(甲醇：水，45∶55, V/V)分离得到化合物5(tR=47 min, 43 mg)；Fr.s5-3先经硅胶柱色谱分离，再经半制备液相色谱(乙腈∶水，38∶62, V/V)分离得到化合物1*(tR=36 min, 无色针晶1.0 mg)。Fr.s8采用中低压液相色谱，以甲醇-水(30%~100%)为流动相进行梯度洗脱，合并流分得Fr.s8-1~Fr.s8-9，其中Fr.s8-4在半制备液相色谱(甲醇∶水，58∶42, V/V)洗脱下得到化合物6(tR=40 min, 47.1 mg)和化合物7(tR=46 min, 9.8 mg)。
乙酸乙酯部位通过硅胶柱色谱进行初步分离，以二氯甲烷-甲醇(100∶0→0∶100，V/V)梯度洗脱，根据TLC分析结果，将洗脱液合并，共获得4个组分，依次标记为 Fr.y1~Fr.y4。Fr.y3采用中压液相色谱，以甲醇-水(10%~100%)为流动相进行梯度洗脱，获得8个组分Fr.y3-1~Fr.y3-8。Fr.y3-3先经过硅胶柱色谱分离，后经半制备液相色谱(乙腈∶水，25∶75, V/V)进一步分离纯化得到化合物8(tR=39 min, 9.9 mg)，半制备液相色谱(乙腈∶水，23∶77, V/V)分离得到化合物11(tR=54 min, 9.9 mg)，半制备液相色谱(乙腈∶水，20∶80, V/V)分离得到化合物12(tR=52 min, 9.1 mg)。Fr.y2经硅胶柱色谱分离，以二氯甲烷-甲醇(100∶0→0∶100, V/V)为流动相进行梯度洗脱得8个组分Fr.y2-1~Fr.y2-8，其中Fr.y2-2经中低压液相色谱，经甲醇-水(10%~100%)梯度洗脱得14个组分Fr.y2-2-1~Fr.y2-2-14。Fr.y2-2-4等分为两部分，一部分用半制备液相色谱(甲醇∶水，25∶75, V/V)分离得到化合物14(tR=60 min, 9.5 mg)，另一部分经半制备液相色谱(甲醇∶水，18∶82, V/V)分离后经过重结晶得到化合物15(tR=70 min, 1.5 mg)；Fr.y2-2-5经硅胶柱色谱分离后，重结晶得到化合物16(5.7 mg)；Fr.y2-2-6经硅胶柱色谱分离后，再进行半制备液相色谱(甲醇∶水，33∶67, V/V)分离，得到化合物13(tR=49 min, 56.7 mg)；Fr.y2-2-7先后经硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20色谱分离纯化，再经过重结晶得到化合物9(5.2 mg)；Fr.y2-2-9经硅胶柱色谱分离和重结晶得到化合物10(17.1 mg)。
1.3.2 单体化合物细胞毒活性筛选试验
采用MTS法测定分得的单体化合物对人白血病HL-60、非小细胞肺癌A549、肝癌SMMC-7721、结肠癌SW480和乳腺癌MDA-MB-231的体外细胞毒活性。将化合物溶于DMSO配制成40 μmol·L-1的各样品储备液，测试前稀释到合适的浓度。阳性对照选用阿霉素和紫杉醇，均按Kaumda等（2020）的方法配制。取对数生长期细胞，使用培养基（含10%胎牛血清）制备单细胞悬液，将细胞接种于96孔板，每孔体积100 μL，于37 ℃、5% CO2条件下预培养24 h。实验设置不同浓度实验组，同时设置阳性对照组和空白对照组，每组设置3个复孔。给药前弃去孔内原培养基，并使用PBS清洗细胞，每孔加入200 μL含药培养基，37 ℃连续培养48 h。终止培养后，弃去孔内的培养液，每孔加入MTS试剂20 μL与培养液100 μL，同时设置3个空白复孔（仅含MTS试剂20 μL与培养液100 μL）。孵育2~4 h后，使用多功能酶标仪于492 nm波长下，读取各孔OD值，根据OD值推测活肿瘤细胞的数目，并计算生长抑制率。对5株肿瘤细胞的增殖抑制作用大于50%的单体化合物进行复筛，复筛的给药浓度分别为0.064、0.32、1.6、8、40 μmol·L-1。采用两点法计算化合物对5株肿瘤细胞的IC50值。
2 结果与分析
2.1 化合物结构鉴定
测定分得单体化合物的1H-NMR、13C-NMR以及二维核磁共振谱、单晶X射线衍射等光谱数据，并结合理化性质和文献对比等方法，进行数据分析和归属，分离鉴定到的16个化合物结构如图1所示。
图 1 古羊藤中分得的化合物
Fig. 1 Compounds isolated from Streptocaulon juventas
​化合物1​*   无色针晶（甲醇-水），熔点为126.5 ℃；比旋光度 [α]D20.0​+8.6 (c​ =0.1, MeOH)；HR-ESI-MS (m/z​) 273.146 0 [M+Na]+​ (计算值为C15​H22​NaO3​，273.146 1), 确定分子式为C15​H22​O3​，不饱和度为5。IR中3 435、1 633 cm-1​提示可能含有羟基和羰基。
1H-NMR(500 MHz, CDCl3)显示含有2个烯氢信号[δH 6.17(1H, dd, J=10.1, 6.6 Hz, H-3), δH 4.82(2H, dd, J=3.6, 2.1 Hz, H-12)]，3个亚甲基氢信号 [δH 2.39(2H, m, H-4), δH 2.32(2H, m, H-6), δH 1.23(1H, ddd, J=12.6, 10.0, 2.6 Hz, H-9a), δH 2.51(1H, m, H-9b)]，3个次甲基氢信号 [δH 4.98(1H, ddd, J=11.8, 4.0, 1.7 Hz, H-10), δH 3.03(1H, dq, J=14.5, 5.0 Hz, H-5), δH 2.45(1H, m, H-8)]和3个甲基氢信号 [δH 1.94(3H, s, H-15), 1.81(3H, s, H-13), 1.02(3H, d, J=6.7 Hz, H-14)]。
13C-NMR(125 MHz, CDCl3)和DEPT显示15个碳信号。δC 214.7、206.5为2个酮羰基碳信号；δC147.6、137.1、142.8、110.6为4个烯碳信号，表明分子中有2个双键；δC 46.1、41.7、34.5为3个亚甲基碳信号；δC 70.3、46.8、45.6为3个次甲基碳信号，其中δC 70.3为连氧碳信号；还有3个甲基碳信号δC21.3、18.7、12.4（表1）。结合上述基团及不饱和度提示该化合物存在1个环。
表 1 化合物1*的1H-NMR和13C-NMR数据
Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of Compound 1*
1H-1H COSY（图2）显示H-3/4/5/6相关，说明存在 [-CH-CH2-CH-CH2-]片段；H-8/9/10相关，说明存在 [-CH-CH2-CH-]片段。由HMBC（图2）可知，H-12与C-11、C-5、C-13相关，推测存在甲基乙烯基碎片且与C-5相连；H-14与C-8、C-9相关，H-15与C-2、C-3相关，推测C-8、C-2分别连有甲基；HMBC还显示H-9与C-1相关，H-4与C-2相关，H-6与C-4相关，提示化合物1*存在1个十元环，确定其平面结构为10-羟基-5-(1-甲基乙烯基)-2,8-二甲基-2-环癸烯-1,7-二酮(10-hydroxy-2,8-dimethyl-5-(1-methylethenyl)-2-cyclodecene-1,7-dione)（图3）；经SciFinder检索，化合物1*为新化合物，为进一步确定其绝对构型，利用单晶X射线衍射分析(图4)确定化合物1*的绝对构型为5S,8S,10S, 命名为古羊藤二酮 A(strejuvdione A)，化合物晶体结构参数见表2。
图 2 化合物1*的1H-1H COSY(━) 及HMBC(→) 相关图
Fig. 2 1H-1H COSY(━) and HMBC(→) correlogram of Compound 1*
图 3 化合物1*的单晶结构
Fig. 3 Crystal structure for Compound 1*
图 4 化合物1*的结构式
Fig. 4 Structure of Compound 1*
表 2 化合物1*的晶体结构参数
Table 2 Crystal data and structure refinement for Compound 1*
​化合物2  ​ 黄色油状物，ESI-MS (m/z​)：299.2 [M+Na]+​。分子式为C17​H24​O3​。1​H-NMR (500 MHz, CDCl3​) δ​：6.84 (1H, d, J​ =7.6 Hz, H-5′), 6.81 (1H, m, H-5), 6.71 (1H, d, J​ =1.9 Hz, H-2′), 6.68 (1H, dd, J​ =8.0, 1.9 Hz, H-6′), 6.08 (1H, d, J​ =16.0 Hz, H-4), 5.52 (1H, s, 4′-OH), 3.87 (3H, s, 3′-OCH3​), 2.85 (2H, m, H-1), 2.84 (2H, m, H-2), 2.19 (2H, m, H-6), 1.44 (2H, m, H-7), 1.30 (2H, m, H-9), 1.28 (2H, m, H-8), 0.88 (3H, t, J​ =6.9 Hz, H-10)。13​C-NMR (125 MHz, CDCl3​) δ​：30.0 (C-1), 42.1 (C-2), 200.0 (C-3), 130.4 (C-4), 148.16 (C-5), 32.6 (C-6), 27.9 (C-7), 31.5 (C-8), 22.6 (C-9), 14.1 (C-10), 133.4 (C-1′), 111.2 (C-2′), 146.5 (C-3′), 144.0 (C-4′), 114.4 (C-5′), 120.0 (C-6′)。以上数据与文献（李琰等，2017）报道基本一致，故鉴定化合物2​为6-姜烯酚（6-shogoal）。
​化合物3​   无色棱柱状结晶，易溶于甲醇、乙酸乙酯，ESI-MS (m/z​)：257.1 [M+Na]+​。分子式为C15​H22​O2​。1​H-NMR (500 MHz, CDCl3​) δ​：5.76 (1H, s, H-9), 2.89 (1H, s, 8-OH), 2.65 (1H, d, J​ =15.7 Hz, H-6a), 2.11 (1H, d, J​ =15.6 Hz, H-6b), 1.87~2.00 (6H, m, H-1, 2, 3, 4), 1.81 (3H, s, H-15), 1.66 (3H, s, H-13), 1.59 (3H, s, H-12), 1.02 (3H, d, J​ =6.2 Hz, H-14)。13​C-NMR (125 MHz, CDCl3​) δ​：51.4 (C-1), 21.1 (C-2), 31.4 (C-3), 40.5 (C-4), 85.8 (C-5), 37.6 (C-6), 139.4 (C-7), 101.7 (C-8), 125.7 (C-9), 137.4 (C-10), 122.4 (C-11), 22.5 (C-12), 27.7 (C-13), 12.0 (C-14), 19.0 (C-15)。以上数据与文献（Mi et al., 2024）报道基本一致，故鉴定化合物3​为莪术烯醇（curcumenol）。
​化合物4​   白色无定形粉末，ESI-MS (m/z​)：271.1 [M+Na]+​。分子式为C15​H20​O3​。1​H-NMR (500 MHz, CDCl3​) δ​：6.02 (1H, s, H-12a), 5.87 (1H, d, J​ =1.6 Hz, H-12b), 5.62 (1H, d, J​ =1.6 Hz, H-9), 3.27 (1H, d, J​ =14.7 Hz, H-6a), 2.89 (1H, dd, J​ =11.0, 7.1 Hz, H-1), 2.84 (1H, d, J​ =14.7 Hz, H-6b), 2.18 (1H, m, H-2b), 2.13 (1H, m, H-4), 1.90 (3H, s, H-14), 1.87 (1H, m, H-3a), 1.80 (3H, s, H-13), 1.56 (1H, m, H-3b), 1.50 (1H, m, H-2a), 1.09 (3H, d, J​ =6.9 Hz, H-15)。13​C-NMR (125 MHz, CDCl3​) δ​：44.8 (C-1), 30.1 (C-2), 31.2 (C-3), 44.1 (C-4), 91.1 (C-5), 41.5 (C-6), 199.8 (C-7), 164.3 (C-8), 113.9 (C-9), 161.6 (C-10), 145.1 (C-11), 127.3 (C-12), 17.6 (C-13), 22.8 (C-14), 12.0 (C-15)。以上数据与文献（Park et al., 2012）报道基本一致，故鉴定化合物4​为curcuzedoalide。
​化合物5​   白色针状结晶，ESI-MS (m/z​): 296.3 [M-H2​O]+​。分子式为C21​H30​O2​。1​H-NMR (500 MHz, CDCl3​) δ​：6.71 (1H, dd, J​ =3.4, 1.9 Hz, H-16), 5.36 (1H, dd, J​ =4.2, 1.9 Hz, H-6), 3.53 (1H, m, H-3), 2.26 (3H, s, H-21), 1.04 (3H, s, H-19), 0.91 (3H, s, H-18)。13​C-NMR (125 MHz, CDCl3​) δ​：37.3 (C-1), 31.8 (C-2), 71.9 (C-3), 42.4 (C-4), 141.5 (C-5), 121.2 (C-6), 31.7 (C-7), 30.3 (C-8), 50.6 (C-9), 36.8 (C-10), 20.8 (C-11), 34.3 (C-12), 46.2 (C-13), 56.6 (C-14), 32.4 (C-15), 144.7 (C-16), 155.5 (C-17), 15.9 (C-18), 19.5 (C-19), 197.1 (C-20), 27.3 (C-21)。以上数据与文献（Shingate et al., 2011）报道基本一致，故鉴定化合物5​为16-dehydropregnenolone。
​化合物6​   无色结晶，ESI-MS (m/z​)：327.2 [M+H]+​。分子式为C21​H26​O3​。1​H-NMR (500 MHz, CDCl3​) δ​：7.00 (1H, dd, J​ =3.6, 1.9 Hz, H-16), 6.17 (1H, dd, J​ =9.8, 2.7 Hz, H-6), 6.12 (1H, d, J​ =10.0 Hz, H-7), 5.69 (1H, s, H-4), 3.71 (1H, dd, J​ =10.4, 4.9 Hz, H-12), 2.55 (1H, m, H-15a), 2.46 (1H, m, H-15b), 2.39 (3H, s, H-21), 1.59 (1H, td, J​ =11.9, 6.7 Hz, H-14), 1.34 (1H, ddd, J​ =13.7, 9.9, 3.9 Hz, H-9), 1.13 (3H, s, H-19), 0.95 (3H, s, H-18)。13​C-NMR (125 MHz, CDCl3​) δ​：34.1 (C-1), 33.8 (C-2), 199.7 (C-3), 124.4 (C-4), 163.0 (C-5), 129.3 (C-6), 138.9 (C-7), 35.0 (C-8), 49.1 (C-9), 36.2 (C-10), 28.7 (C-11), 73.4 (C-12), 52.9 (C-13), 51.5 (C-14), 31.9 (C-15), 149.3 (C-16), 155.3 (C-17), 11.8 (C-18), 16.3 (C-19), 199.1 (C-20), 26.9 (C-21)。以上数据与文献（冉红玲，2022）报道基本一致，故鉴定化合物6​为neridienone A。
​化合物7  ​ 无色方晶（甲醇），ESI-MS (m/z​)：329.2 [M+H]+​, 分子式为C21​H28​O3​。1​H-NMR (500 MHz, CDCl3​) δ​：6.97 (1H, dd, J​ =3.3, 1.9 Hz, H-16), 5.86 (1H, s, H-4), 5.74 (1H, s, 12-OH), 3.67 (1H, dd, J​ =10.6, 5.0 Hz, H-12), 2.37 (3H, s, H-21), 1.21 (3H, s, H-19), 0.91 (3H, s, H-18)。13​C-NMR (125 MHz, CDCl3​) δ​：35.5 (C-1), 34.1 (C-2), 199.2 (C-3), 124.4 (C-4), 170.2 (C-5), 32.7 (C-6), 31.2 (C-7), 32.8 (C-8), 52.0 (C-9), 38.7 (C-10), 29.0 (C-11), 73.4 (C-12), 52.6 (C-13), 53.4 (C-14), 32.9 (C-15), 149.7 (C-16), 155.2 (C-17), 11.8 (C-18), 17.2 (C-19), 199.6 (C-20), 26.9 (C-21)。以上数据与文献（崔研等，2014）报道基本一致，故鉴定化合物7​为12β​-羟基-孕甾-4,16-二烯-3,20-二酮（12β​-hydroxy-pregna-4,16-diene-3,20-dione）。
​化合物8​   无色针晶，易溶于甲醇，EI-MS (m/z​)：390.0 [M]+​，分子式为C23​H34​O5​。1​H-NMR (500 MHz, CDCl3​) δ​：5.87 (1H, s, H-22), 4.98 (1H, d, J​ =18.2 Hz, H-21a), 4.80 (1H, d, J​ =18.1 Hz, H-21b), 4.17 (1H, s, 3-OH), 2.78 (1H, dd, J​ =9.6, 5.5 Hz, H-17), 0.93 (3H, s, H-19), 0.87 (3H, s, H-18)。13​C-NMR (125 MHz, CDCl3​) δ​：25.0 (C-1), 28.0 (C-2), 68.1 (C-3), 37.0 (C-4), 74.8 (C-5), 35.3 (C-6), 23.9 (C-7), 40.9 (C-8), 39.1 (C-9), 40.8 (C-10), 21.7 (C-11), 40.1 (C-12), 49.6 (C-13), 85.6 (C-14), 33.1 (C-15), 27.0 (C-16), 50.5 (C-17), 15.9 (C-18), 16.9 (C-19), 174.8 (C-20), 73.4 (C-21), 117.8 (C-22), 174.8 (C-23)。以上数据与文献（张嫩玲等，2011）报道基本一致，故鉴定化合物8​为杠柳苷元（periplogenin）。
​化合物9  ​ 白色结晶，ESI-MS (m/z​)：413.2 [M+Na]+​, 分子式为C23​H34​O5​。1​H-NMR (500 MHz, DMSO-d6​) δ​：5.91 (1H, s, H-22), 4.95 (1H, d, J​ =18.5 Hz, H-21a), 4.91 (1H, d, J​ =18.3 Hz, H-21b), 4.00 (1H, s, 3-OH), 3.59 (1H, d, J​ =5.6 Hz, H-1), 2.71~2.75 (1H, m, H-17), 0.96 (3H, s, H-19), 0.77 (3H, s, H-18)。13​C-NMR (125 MHz, DMSO-d6​) δ​：66.8 (C-1), 32.2 (C-2), 72.1 (C-3), 32.0 (C-4), 30.9 (C-5), 26.3 (C-6), 20.8 (C-7), 41.0 (C-8), 36.5 (C-9), 40.0 (C-10), 21.7 (C-11), 38.8 (C-12), 49.3 (C-13), 83.6 (C-14), 33.05 (C-15), 26.8 (C-16), 50.1 (C-17), 15.7 (C-18), 18.7 (C-19), 176.4 (C-20), 73.1 (C-21), 116.2 (C-22), 173.9 (C-23)。以上数据与文献（Zhang et al., 2018）报道基本一致，故鉴定化合物9​为acovenosigenin A。
​化合物10​   白色结晶，EI-MS (m/z​)：374.0 [M]+​, 分子式为C23​H34​O4​。1​H-NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​：5.88 (1H, s, H-22), 5.00 (1H, d, J​ =18.4 Hz, H-21a), 4.92 (1H, d, J​ =18.6 Hz, H-21b), 4.04 (1H, s, 3-OH), 2.82 (1H, m, H-17), 0.95 (3H, s, H-19), 0.87 (3H, s, H-18)。13​C-NMR (125 MHz, CD3​OD) δ​：30.8 (C-1), 28.5 (C-2), 67.6 (C-3), 34.1 (C-4), 37.4 (C-5), 27.8 (C-6), 22.4 (C-7), 42.6 (C-8), 36.6 (C-9), 36.4 (C-10), 22.6 (C-11), 40.9 (C-12), 51.0 (C-13), 86.4 (C-14), 33.3 (C-15), 28.0 (C-16), 52.1 (C-17), 16.4 (C-18), 24.2 (C-19), 177.2 (C-20), 75.3 (C-21), 117.7 (C-22), 177.3 (C-23)。以上数据与文献（Zhang et al., 2006）报道基本一致，故鉴定化合物10​为洋地黄毒苷元（digitoxigenin）。
​化合物11  ​ 白色针状粉末，ESI-MS (m/z​)：537.3 [M+H]+​, 分子式为C29​H44​O9​。1​H-NMR (500 MHz, DMSO-d6​) δ​：5.88 (1H, s, H-22), 4.93 (1H, dd, J​ =18.4, 1.9 Hz, H-21a), 4.87 (1H, dd, J​ =18.4, 1.7 Hz, H-21b), 4.11 (1H, d, J​ =7.8 Hz, H-1′), 0.84 (3H, s, H-18), 0.73 (3H, s, H-19) (Paper &​ Franz, 1989)。13​C-NMR (125 MHz, DMSO-d6​) δ​：29.9 (C-1), 26.0 (C-2), 72.6 (C-3), 29.2 (C-4), 35.6 (C-5), 26.4 (C-6), 21.1 (C-7), 40.9 (C-8), 34.9 (C-9), 34.8 (C-10), 20.8 (C-11), 39.0 (C-12), 49.4 (C-13), 83.8 (C-14), 32.2 (C-15), 26.6 (C-16), 50.2 (C-17), 16.7 (C-18), 23.5 (C-19), 176.8 (C-20), 73.1 (C-21), 116.2 (C-22), 173.9 (C-23), 101.1 (C-1′), 73.5 (C-2′), 76.9 (C-3′), 70.1 (C-4′), 76.7 (C-5′), 61.1 (C-6′)。以上数据与文献（Cheung et al., 1981）报道基本一致，故鉴定化合物11​为digitoxigenin-3-O-β​-D-glucoside。
​化合物12​   白色粉末，ESI-MS (m/z​)：575.3 [M+Na]+​, 分子式为C29​H44​O10​。1​H-NMR (500 MHz, DMSO-d6​) δ​：5.88 (1H, s, H-22), 4.93 (1H, dd, J​ =18.5, 1.9 Hz, H-21a), 4.86 (1H, dd, J​ =18.4, 1.8 Hz, H-21b), 4.23 (1H, d, J​ =7.8 Hz, H-1′), 4.03 (1H, s, H-1), 0.78 (3H, s, H-18), 0.73 (3H, s, H-19)（叶纯等，2012）。13​C-NMR (125 MHz, DMSO-d6​) δ​：25.3 (C-1), 25.1 (C-2), 73.5 (C-3), 35.4 (C-4), 72.3 (C-5), 32.9 (C-6), 23,6 (C-7), 39.9 (C-8), 37.9 (C-9), 40.2 (C-10), 21.1 (C-11), 39.0 (C-12), 49.2 (C-13), 83.8 (C-14), 32.2 (C-15), 25.3 (C-16), 50.1 (C-17), 15.6 (C-18), 16.7 (C-19), 176.4 (C-20), 73.1 (C-21), 117.8 (C-22), 173.9 (C-23), 99.7 (C-1′), 72.8 (C-2′), 77.0 (C-3′), 70.1 (C-4′), 76.7 (C-5′), 60.9 (C-6′)。以上数据与文献（张琳等，2007）报道基本一致，故鉴定化合物12​为杠柳苷元葡萄糖苷（periplogenin-glucoside）。
​化合物13​   无色油状，ESI-MS (m/z​)：397.1 [M+Na]+​。分子式为C20​H22​O7​。1​H-NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​：7.04 (2H, d, J​ =1.9 Hz, H-2, 2′), 6.84 (2H, dd, J​ =8.0, 1.7 Hz, H-6, 6′), 6.78 (2H, d, J​ =8.1 Hz, H-5, 5′), 4.83 (1H, d, J​ =5.0 Hz, H-7′), 4.66 (1H, s, H-7), 4.45 (1H, dd, J​ =17.4, 1.4 Hz, H-9′a), 4.02 (1H, d, J​ =9.3 Hz, H-9a), 3.85 (1H, d, overlap, H-9b), 3.84 (6H, s, 3, 3′-OMe), 3.74 (1H, dd, J​ =8.9, 6.2 Hz, H-9′b), 3.04 (1H, dt, J​ =8.2, 5.9 Hz, H-8′)。13​C-NMR (125 MHz, CD3​OD) δ​：129.0 (C-1), 112.6 (C-2), 148.6 (C-3), 147.3 (C-4), 115.6 (C-5), 121.5 (C-6), 89.2 (C-7), 92.2 (C-8), 76.0 (C-9), 133.5 (C-1′), 111.2 (C-2′), 148.2 (C-3′), 147.4 (C-4′), 116.0 (C-5′), 120.4 (C-6′), 87.7 (C-7′), 62.3 (C-8′), 71.9 (C-9′), 56.3 (3-OMe), 56.3 (3′-OMe)。以上数据与文献（Yeo et al., 2004）报道基本一致，故鉴定化合物13​为8-hydroxypinoresinol。
​化合物14  ​ 微黄色的固体，ESI-MS (m/z​)：247.1 [M+Na]+​。分子式为C13​H20​O3​。1​H-NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​：5.90 (1H, t, J=1.4 Hz, H-4), 5.85 (1H, dd, J​ =15.5, 5.3 Hz, H-8), 5.78 (1H, d, J​ =15.4 Hz, H-7), 4.40 (1H, q, J​ =6.0 Hz, H-9), 2.44 (1H, d, J​ =17.0 Hz, H-2a), 2.24 (1H, d, J​ =17.1 Hz, H-2b), 1.89 (3H, t, J​ =1.4 Hz, H-13), 1.30 (3H, d, J​ =6.4 Hz, H-10), 1.08 (3H, s, H-12), 1.01 (3H, s, H-11)。13​C-NMR (125 MHz, CD3​OD) δ​：41.3 (C-1), 49.8 (C-2), 198.1 (C-3), 127.0 (C-4), 162.8 (C-5), 79.1 (C-6), 129.1 (C-7), 135.8 (C-8), 68.2 (C-9), 24.9 (C-10), 23.0 (C-11), 23.9 (C-12), 19.0 (C-13)。以上数据与文献（Yao et al., 2016）报道基本一致，故鉴定化合物14​为布卢门醇A（blumenol A）。
​化合物15​   淡黄色油状物，EI-MS (m/z​): 225.0 [M-H]+​, 分子式为C13​H22​O3​。1​H-NMR (500 MHz, CD3​OD) δ​：5.80 (1H, s, H-4), 3.60~3.64 (1H, m, H-9), 2.57 (1H, d, J​ =18.1 Hz, H-2a), 2.13 (1H, d, J​ =11.3 Hz, H-2b), 2.01 (3H, d, J​ =1.3 Hz, H-13), 1.89~1.95 (1H, m, H-7a), 1.72~1.79 (1H, m, H-8a), 1.61~1.72 (1H, m, H-7b), 1.33~1.42 (1H, m, H-8b), 1.13 (3H, d, J​ =6.2 Hz, H-10), 1.06 (3H, s, H-12), 0.99 (3H, s, H-11)。13​C-NMR (125 MHz, CD3​OD) δ​：42.9 (C-1), 51.0 (C-2), 200.8 (C-3), 126.5 (C-4), 171.8 (C-5), 79.2 (C-6), 35.7 (C-7), 35.3 (C-8), 69.3 (C-9), 23.5 (C-10), 24.1 (C-11), 23.7 (C-12), 21.8 (C-13)。以上数据与文献（朱登辉等，2023）报道基本一致, 故鉴定化合物15​为布卢门醇B（blumenol B）。
​化合物16​   黄色结晶，ESI-MS (m/z​)：193.0 [M+H]+​, 分子式为C10​H8​O4​。1​H-NMR (500 MHz, DMSO-d6​) δ​：10.31 (1H, s, 7-OH), 7.89 (1H, d, J​ =9.4 Hz, H-4), 7.20 (1H, s, H-5), 6.76 (1H, s, H-8), 6.20 (1H, d, J​ =9.4 Hz, H-3), 3.79 (3H, s, 6-OMe)。13​C-NMR (125 MHz, DMSO-d6​) δ​：160.6 (2-C=O), 111.7 (C-3), 144.5 (C-4), 109.5 (C-5), 145.2 (C-6), 151.1 (C-7), 102.7 (C-8), 149.5 (C-9), 110.5 (C-10), 56.0 (6-OMe)。以上数据与文献（李骅轩等，2019）报道基本一致，故鉴定化合物16​为东莨菪内酯（scopoletin）。
2.2 单体化合物细胞毒活性筛选试验
采用MTS法对从古羊藤中分离得到的化合物2-16（新化合物1*因量少暂未测试）进行细胞毒活性筛选，结果显示，在40 μmol·L-1浓度下，化合物2、6-12对人白血病HL-60、非小细胞肺癌A549、肝癌SMMC-7721、乳腺癌MDA-MB-231和结肠癌SW480细胞增殖抑制具有一定的细胞毒性，其余化合物无明显细胞毒活性，因此进一步测定化合物2、6-12的IC50值，结果见表3。
表 3 化合物2, 6-12 对5株肿瘤细胞增殖抑制的IC50值
Table 3 IC50 values of compounds 2, 6-12 against the proliferation of five tumor cell lines
注：数值=平均值±标准差，n=3；a表示阳性对照;—表示未进行筛选。
Note: Value=x¯±s, n=3; a indicates the positive control;—indicates no filtering.
3 讨论与结论
文献报道和项目组前期研究表明古羊藤提取物具有抗肿瘤活性，本研究在前期进行活性部位初筛的基础上，综合运用现代分离技术从活性部位中分离鉴定出16个化合物，其中主要有5个倍半萜，5个强心苷（元）和3个C21甾体化合物。化合物1*为新的吉玛烷型倍半萜，化合物2-4、6、7、13-15为首次从该植物中分离得到。分得的强心苷（元）和C21甾体化合物与文献报道的古羊藤化学成分类型相似，本研究首次从古羊藤中发现倍半萜类化合物，包括吉马烷型、愈创木烷型和降倍半萜等不同骨架类型，研究结果丰富了古羊藤的化学成分类型，拓展了古羊藤化学成分和活性研究的新角度。吉玛烷型倍半萜类化合物具有广泛的生物活性，如抗肿瘤、抗菌和抗炎等。该类化合物对HL-60白血病细胞、结肠癌细胞及肺癌细胞等均表现出显著的细胞毒活性（徐冬冬，2016）。此外，与化合物1*结构相似的莪术二酮已被证实具有显著的肝保护作用，可改善对乙酰氨基酚诱导的肝损伤（赵日升等，2025）；莪术二酮能抑制凝血酶诱导的血小板活化，发挥抗血栓作用（程紫薇，2024）。基于上述相似化合物的活性特征，未来可对化合物1*的细胞毒活性、肝保护及抗血栓等作用进行深入研究，以评估其潜在的药用价值。
细胞毒活性实验结果表明，古羊藤中的甾体类化合物6-12具有细胞毒活性，特别是强心苷类化合物8-12 对5种肿瘤细胞增殖抑制的IC50值均小于10 μmol·L-1，表明有显著的细胞毒活性，验证了强心苷类可能是古羊藤抗肿瘤的重要物质基础的结论（Yang et al., 2019）。Xue等（2014)研究发现化合物10比化合物9的细胞毒活性更强，表明强心苷元C-1的羟基对生物活性有影响，推测可能与羟基增加分子极性，降低细胞膜穿透能力有关。化合物11、12与相应的苷元洋地黄毒苷元(10)和杠柳苷元(8)相比活性增强，证明C-3位的糖基也是强心苷抗肿瘤活性的关键因素（王冬冬，2017）。但是，目前对古羊藤中强心苷结构和抗肿瘤活性相关性的研究报道较少，而且强心苷类化合物能使心肌细胞内的钙离子浓度发生变化，可能引发心脏毒性(陈虎，2016)，因此今后很有必要系统地开展古羊藤中强心苷类的构效关系和毒性研究。本研究还发现C21甾体化合物6、7对5种肿瘤细胞株增殖抑制的IC50值分别为1.959~8.969 μmol·L-1和4.556~21.100 μmol·L-1，具有较强的细胞毒活性，表明这类成分也可能与古羊藤抗肿瘤作用相关，如何导向性地分离富集更多C21甾体化合物，并开展其药理活性和作用机制研究，是今后关注的重点之一。
图 1 古羊藤中分得的化合物
Fig. 1 Compounds isolated from Streptocaulon juventas
图 2 化合物1*的1H-1H COSY(━) 及HMBC(→) 相关图
Fig. 2 1H-1H COSY(━) and HMBC(→) correlogram of Compound 1*
图 3 化合物1*的单晶结构
Fig. 3 Crystal structure for Compound 1*
图 4 化合物1*的结构式
Fig. 4 Structure of Compound 1*
表 1 化合物1*的1H-NMR和13C-NMR数据
Table 1 1H-NMR and 13C-NMR data of Compound 1*
表 2 化合物1*的晶体结构参数
Table 2 Crystal data and structure refinement for Compound 1*
表 3 化合物2, 6-12 对5株肿瘤细胞增殖抑制的IC50值
Table 3 IC50 values of compounds 2, 6-12 against the proliferation of five tumor cell lines
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